慢病毒載體可感染分裂細(xì)胞及非分裂細(xì)胞。其轉(zhuǎn)移基因片段容量較大，目的基因表達(dá)時(shí)間較長(zhǎng)，不易引發(fā)宿主免疫反應(yīng)等諸多優(yōu)點(diǎn)；因此，慢病毒己經(jīng)成為表達(dá)外源基因或外源shRNA的常用載體形式之一， 并且應(yīng)用越來(lái)越廣泛。

慢病毒濃縮液介紹

EZ慢病毒濃縮液是一種快速濃縮慢病毒的產(chǎn)品，使用未濃縮病毒上清與本產(chǎn)品低溫孵育后低速離心即可獲得濃縮病毒液。不同于傳統(tǒng)的耗時(shí)耗力的超濾、超速離心法，使用本產(chǎn)品操作簡(jiǎn)便、快捷、安全，回收率高。

慢病毒濃縮液優(yōu)勢(shì)

 ? 高濃縮比：濃縮體積高達(dá)240倍，如：可將120mL的病毒上清濃縮至500uL；

 ? 高回收率：經(jīng)測(cè)試，病毒的回收率高達(dá)92%；

 ? 高濃縮滴度：經(jīng)測(cè)試，使用本產(chǎn)品濃縮后病毒滴度往往可達(dá)108或109高病毒；

 ? 高病毒活性：濃縮后病毒具有更佳的轉(zhuǎn)導(dǎo)效果。

慢病毒濃縮液操作步驟

① 收集 48 h 和 72 h 的 293T 細(xì)胞慢病毒上清液，4℃， 2000 g 離心 10 min。 

② 上清液用 0.45 μm 濾膜過(guò)濾，去除細(xì)胞碎片。【注】：濾膜需使用低蛋白吸附的纖維素醋酸酯或聚醚 砜(PES)膜。切忌用硝酸纖維素膜(NC)。 

③ 按慢病毒過(guò)濾液體積:濃縮試劑體積= 4:1 比例混合，搖勻，4℃ 靜置過(guò)夜，或冰上孵育至少 3 h，適當(dāng) 延長(zhǎng)孵育時(shí)間可提高慢病毒的回收率。 

④ 完成孵育后，4℃，3500 g 離心 15 min，小心吸去上清液。

⑤ 用適量體積 PBS 輕輕反復(fù)吹吸病毒沉淀，重懸慢病毒。 

⑥ 留少許病毒液測(cè)定滴度，其他分裝后保存于-80℃。【注】：因凍融會(huì)顯著降低慢病毒活性，請(qǐng)務(wù)必分 裝保存。

慢病毒濃縮液注意事項(xiàng)

 • 本產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。

 • 慢病毒相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作請(qǐng)?jiān)谏锇踩駜?nèi)完成。

 • 注意將濃縮試劑和病毒液充分混合。

 • 細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)對(duì)于病毒包裝至關(guān)重要，因此需保證良好的細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)和較少的細(xì)胞傳代次數(shù)。

 • 病毒切勿反復(fù)凍融，如果實(shí)在需要凍融，次數(shù)盡量不要超過(guò) 3 次，每?jī)鋈谝淮未蠹s有 10%左右的病毒損失，應(yīng)按照每次使用的病毒量來(lái)分裝，保存于-80℃。保存時(shí)間盡量不要超過(guò) 6 個(gè)月。